分光光度計(jì)原理及分類介紹

一、分光光度計(jì)的一般原理：
分光光度計(jì)是利用分光光度法，通過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。
不同種類的分光光度計(jì)的基本原理相似，都是利用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源。光源透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光源被吸收，通過(guò)測(cè)量樣品的吸光值，經(jīng)過(guò)計(jì)算可以轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

二、分光光度計(jì)類型，及應(yīng)用領(lǐng)域：
分光光度計(jì)有哪幾種不同的分類方式：
1.分光光度計(jì)按照波長(zhǎng)及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為：
（1）可見光分光光度計(jì)：測(cè)定波長(zhǎng)范圍為400～760 nm的可見光區(qū);
（2）紫外分光光度計(jì)：測(cè)定波長(zhǎng)范圍為200～400nm的紫外光區(qū);
（3）紅外分光光度計(jì)：測(cè)定波長(zhǎng)范圍為大于760nm的紅外光區(qū);
（4）熒光分光光度計(jì)：用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜;
（5）原子吸收分光光度計(jì)：光源發(fā)出被測(cè)的特征光譜輻射，被經(jīng)過(guò)原子化器后的樣品蒸氣中的待測(cè)元素基態(tài)原子所吸收，通過(guò)測(cè)定特征輻射被吸收的大小，來(lái)求出被測(cè)元素的含量。
2.分光光度計(jì)按自動(dòng)化程度分類：可分為手動(dòng)、半自動(dòng)、自動(dòng)分光光度計(jì)。
3.分光光度計(jì)按軟件可分為：帶掃描、不帶掃描。

三、分光光度計(jì)zui常見的用途和常用波長(zhǎng)：
1.核酸的定量
核酸的zui高吸收峰的吸收波長(zhǎng)260 nm。利用260nm的波長(zhǎng)可以定量測(cè)量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA的濃度。
除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度。如A260/A280的比值，用于評(píng)估樣品的純度，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。
A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
A320檢測(cè)溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
2.蛋白質(zhì)的直接定量
這種方法是在280nm波長(zhǎng)，直接測(cè)試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。
3.細(xì)菌細(xì)胞密度
細(xì)菌培養(yǎng)過(guò)程中，需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測(cè)定細(xì)菌細(xì)胞密度。
OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長(zhǎng)的標(biāo)準(zhǔn)方法。在600nm波長(zhǎng)下，以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液，測(cè)量定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。