分光光度計原理及分類介紹

一、分光光度計的一般原理：
分光光度計是利用分光光度法，通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。
不同種類的分光光度計的基本原理相似，都是利用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源。光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，通過測量樣品的吸光值，經(jīng)過計算可以轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

二、分光光度計類型，及應(yīng)用領(lǐng)域：
分光光度計有哪幾種不同的分類方式：
1.分光光度計按照波長及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為：
（1）可見光分光光度計：測定波長范圍為400～760 nm的可見光區(qū);
（2）紫外分光光度計：測定波長范圍為200～400nm的紫外光區(qū);
（3）紅外分光光度計：測定波長范圍為大于760nm的紅外光區(qū);
（4）熒光分光光度計：用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜;
（5）原子吸收分光光度計：光源發(fā)出被測的特征光譜輻射，被經(jīng)過原子化器后的樣品蒸氣中的待測元素基態(tài)原子所吸收，通過測定特征輻射被吸收的大小，來求出被測元素的含量。
2.分光光度計按自動化程度分類：可分為手動、半自動、自動分光光度計。
3.分光光度計按軟件可分為：帶掃描、不帶掃描。

三、分光光度計zui常見的用途和常用波長：
1.核酸的定量
核酸的zui高吸收峰的吸收波長260 nm。利用260nm的波長可以定量測量溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA，以及RNA的濃度。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度。如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。
A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。
2.蛋白質(zhì)的直接定量
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg 公式，光度計可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。
3.細(xì)菌細(xì)胞密度
細(xì)菌培養(yǎng)過程中，需要采用分光光度計準(zhǔn)確測定細(xì)菌細(xì)胞密度。
OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。在600nm波長下，以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液，測量定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。