測定蛋白質(zhì)含量的方法有哪些,其原理各是什么

Bradford法測定蛋白質(zhì)濃度
實驗原理：
雙縮脲法（Biuret法）和Folin—酚試劑法（Lowry法）的明顯缺點和許多限制，促使科學家們?nèi)ふ腋玫牡?/span>白質(zhì)溶液測定的方法。1976年由Bradford建立的考馬斯亮蘭法（Bradford法），是根據(jù)蛋白質(zhì)與染料相結(jié)合的原理設(shè)計的。這種蛋白質(zhì)測定法具有超過其他幾種方法的突出優(yōu)點，因而正在得到廣泛的應(yīng)用。這一方法是目前靈敏度*高的蛋白質(zhì)測定法。考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合，使染料的最大吸收峰的位置（max），由465nm變?yōu)?95nm，溶液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色。在595nm下測定的吸光度值A(chǔ)595，與蛋白質(zhì)濃度成正比。

Bradford法的突出優(yōu)點是：
（1）靈敏度高,據(jù)估計比Lowry法約高四倍，其低值蛋白質(zhì)檢測量可達1?g。這是因為蛋白質(zhì)與染料結(jié)合后產(chǎn)生的顏色變化很大，蛋白質(zhì)-染料復合物有更高的消光系數(shù)，因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多。
（2）測定快速、簡便，只需加一種試劑。完成一個樣品的測定，只需要5分鐘左右。由于染料與蛋白質(zhì)結(jié)合的大約只要2分鐘即可完成，其顏色可以在1小時內(nèi)保持穩(wěn)定，且在5分鐘至20分鐘之間，顏色的穩(wěn)定性*好。因而*不用像Lowry法那樣費時和嚴格地控制時間。
（3）干擾物質(zhì)少，如干擾Lowry法的K+、Na+、Mg2+離子、Tris緩沖液、糖和蔗糖、甘油、巰基乙醇、EDTA等均不干擾此測定法。